Utilisation d'Agrobacterium tumefaciens et Agrobacterium rhizogenes comme vecteurs de clonage d'un gène dans la tomate et le tournesol

Résumé

L'introduction d'un gène Pl provenant d'un. champignon Cladosporum fulvum,dans le génome de deux plantes supérieures, la tomate et le tournesol, a été réalisée en utilisant Agrobacterium tumefaciens et Agrobacterium rhizogenes comme vecteurs. Le gène Pl a été cloné dans le plasmide pBIN19 dérivé du plasmide pRK252. Le plasmide recombiné pBIN Pl a été d'abord introduit dans une souche d'Escherichia coli ED 8767 à partir de laquelle il a été transféré dansAgrobacterium par une conjugaison triparentale où le plasmide pB IN Pl a été mobilisé par un plasmide conjugatifpRK 20l3.Deux systèmes binaires ont été ainsi obtenus et utilisés dans la transformation génétique des tissus végétaux. La sélection des tissus de tomate et de tournesol transformés a été réalisé grâce à l'association du gène Pl avec un gène conférant la résistance à la kanamycine. La preuve moléculaire de cette transformation des tissus est obtenue par hybridation de leur ADN génomique avec une sonde marquée du gène P1.


Use of Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes as cloning vectors in tomatoe and sunflower

Genetic transformation of tomatoe and sunflower tissues by a fungus gene called Pl originating from Cladosporium fulvum was attempted using Agrobcaterium tumefaciens or Agrobacterium rhizogenes as vectors. Pl was initially cloned in the plasmid pBIN 19 harboured by E.coli ED 8767 leading to p BIN Pl plasmid, introduced either in A. tumefaciens or A. rhizogenes using a triparental mating approach. The plasmid pB IN Pl was mobilized by the plasmid p RK20l3. Two binary systems were thus constructed and used for the transformation of the plant tissues. Transformed tissues from tomatoe and sunflower were selected on their ability to grow on medium containing kanamycin. The molecular proof of the transformation was obtained by hybridizing genomic DNA from tomatoe or sunflower tissues with a complementary labeled DNA fragement of Pl.